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伊红染色液(5%)采用进口原料和特殊防腐剂，操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色，可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在伊红染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染，该染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液，染色后细胞浆呈粉红色或红色。

伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末，分子式为C20H6O5Br4Na2，分子量为691.86。伊红最适宜与苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。水溶性伊红Y含有一个醌型苯环的发色团和两个形成钠盐的酸性助色团(R-COONa、R-ONa)，这种形成盐类的酸性染料在水中溶解时解离为带负电荷的色酸部分(R-COO-、R-O-)，即染料的有色部分和带正电荷的钠离子部分(Na+)，染色时伊红Y带负电荷的色酸部分与组织内带正电荷的物质以离子键的形式结合而显色。

• 如果需要脱水、透明和封片处理，需自备二甲苯或脱蜡透明液，中性树胶或其它封片剂；如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯或脱蜡透明液。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 样品处理
  
  • 对于石蜡切片：
    ① 二甲苯或脱蜡透明液中脱蜡5～10min。
    ② 换用新鲜的二甲苯或脱蜡透明液，再脱蜡5～10min。
    ③ 无水乙醇5min。
    ④ 90%乙醇2min。
    ⑤ 70%乙醇2min。
    ⑥ 蒸馏水2min。
    
  • 对于冰冻切片：蒸馏水2min。
    
  • 对于培养细胞：
    ① 用4%多聚甲醛固定10min以上。
    ② 蒸馏水洗涤2分钟。
    ③ 换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。
• 伊红染色
  对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5～5min(根据染色结果和要求调整时间)。如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
  
  • 如果用于免疫组化等染色后的复染，参考上述步骤在其它染色完成后进行伊红染色。
• 脱水、透明、封片或进行其它染色
  • 脱水、透明、封片：
    ① 95%乙醇脱水2min。
    ② 换用新鲜的95%乙醇再脱水2min。
    ③ 二甲苯或脱蜡透明液透明5min。
    ④ 换用新鲜的二甲苯或bjbalb脱蜡透明液，再透明5min。
    ⑤ 用中性树胶或其它封片剂封片。
    ⑥ 显微镜下观察，细胞浆呈粉红色或红色。
    
  • 进行其它染色：
    如果进行免疫荧光染色或进行Hoechst等荧光染料的染色，在伊红染色液染色后：
    ① 70％乙醇洗涤2次，每次2min。
    ② PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5min。
    ③ 进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色。